| dc.description.abstract | El objetivo del presente trabajo fue implementar una técnica de purificación de la/s bacteriocina/s producidas por una cepa de BAL nativa, Lactococcus lactis GU967439, con el propósito de identificar dicha/s sustancia/s. Para cumplir con el objetivo, en primer lugar, los cultivos de esta BAL fueron optimizados, de manera de obtener el mayor título posible de bacteriocinas para los pasos posteriores de concentración y purificación. Fue planteado una secuencia metodológica de tres pasos: precipitación con sulfato de amonio, cromatografía de intercambio iónico y cromatografía de fase reversa (RP-HPLC). A su vez, se evaluaron en el sobrenadante crudo y concentrado, diferentes métodos de conservación (refrigeración, congelación y liofilización). Los resultados del crecimiento de la BAL en medio de cultivo mostraron actividad antimicrobiana baja (320 UA/mL), atribuyendo dicho valor a fenómenos de adsorción de la bacteriocina a la pared celular. Mediante ensayos de desadsorción (sonicación y tratamiento con detergentes) se logró optimizar el cultivo a una producción de 1280 UA/mL. Durante la concentración de la bacteriocina se definió un 40% de saturación de sulfato de amonio como el adecuado para los siguientes pasos de purificación (mayor actividad antimicrobiana). La cromatografía de intercambio iónico mostró dos picos de absorbancia, el primero al inicio del gradiente, el cual presentó actividad antimicrobiana, lo que indicaría la elución de la bacteriocina y que ésta no es retenida o es retenida débilmente en la columna. El último paso de purificación (RP-HPLC), se vio dificultado debido a la pérdida de estabilidad de la bacteriocina. Los ensayos de conservación de la actividad antimicrobiana mostraron la pérdida de la misma a lo largo del tiempo, independientemente de la forma en que se la conserve, aunque con diferentes cinéticas. | |
