| dc.description.abstract | La presente Tesis está basada en 5 estudios, en los que se investigaron aspectos endócrino-moleculares, histológicos y bioquímicos involucrados con la remodelación de la matriz extracelular (MEC) y relajación del cérvix ovino. Los estudios se realizaron durante el ciclo estral en estación reproductiva y durante el anestro estacional en ovejas inducidas a ovular. Se utilizaron 46 ovejas Corriedale y se realizaron tres experimentos: 1º) Ovejas ciclando en estación reproductiva sacrificadas los días 1 (n=7), 6 (n=6) o 13 (n=7) de detectado estro (Estudios I, II y III). 2º) Ovejas en anestro estacional tratadas con GnRH para inducir la ovulación con o sin progesterona (P4) previa y sacrificadas sin tratamiento (n=4), inmediatamente luego del tratamiento con P4 (n=4) y un día luego del tratamiento con GnRH (n=4) o P4+GnRH (n=3) (Estudios IV y V). 3º) Ovejas en anestro tratadas con P4+GnRH para inducir la ovulación y sacrificadas los días 1 (n=6) o 5 (n=5) después del bolo de GnRH (Estudios IV y V). En los 3 experimentos se obtuvieron muestras de sangre para determinaciones de 17?estradiol (E2) y P4 por RIA y al sacrificio se obtuvieron muestras de cérvix craneal y caudal para estudios moleculares, histológicos y bioquímicos. El transcripto del receptor de estrógenos subtipo ? (ARNm RE?) fue determinado por hibridización en solución y las concentraciones de receptores de estrógenos (RE) y progesterona (RP) por ensayos de unión (Estudios I y IV). Los RE?, los receptores de LH (RLH) y de oxitocina (ROx) y la ciclooxigenasa-2 (COX-2) se localizaron y cuantificaron en los epitelios y estromas cervicales por inmunohistoquímica (Estudio II). Las metaloproteinasas de la MEC -2 y -9 (MMP-2 y MMP-9) fueron identificadas y localizadas por inmunhistoquímica y las formas Latente y Activa fueron determinadas por zimografía en SDS-PAGE. La distribución de las fibras y la concentración de colágeno se determinaron por la técnica tricrómica de van Giesson y por la cuantificación espectrofotométrica de hidroxiprolina, respectivamente (Estudios III y V). Durante el ciclo estral en estación reproductiva, se encontraron mayores concentraciones cervicales de ARNm RE?, RE y RP alrededor de la ovulación luego del pico preovulatorio de E2 y menores concentraciones en fase lútea a predominio de P4 (Estudio I). Los niveles de expresión de RE?, RLH, ROx y COX-2 fueron mayores en los epitelios que en los estromas cervicales: para RE? la mayor expresión se encontró en epitelios luminales alrededor de la ovulación, mientras que para RLH, ROx y COX-2 la mayor expresión se encontró en fase lútea tardía (Estudio II). La MMP-2 fue predominante en cérvix ovino, ya que MMP-9 solo fue detectada en menos del 9% de las muestras. El área ocupada por las fibras de colágeno y la concentración de colágeno disminuyeron alrededor de la ovulación, asociadas al aumento de 10 a 20 veces en la concentración y en la actividad de la MMP-2, producida por los fibroblastos del estroma (Estudio III). Se sugiere que los E preovulatorios, a través del RE? epitelial, dirigen la cascada de eventos que llevan al incremento de la desagregación y de la degradación enzimática del colágeno al estro, demostrando la coexistencia de estos dos procesos en los mecanismos de remodelación de la MEC. Durante el anestro estacional, con concentraciones basales de E2 y P4 circulantes, el cérvix mostró expresión constitutiva de ARNm RE?, RE, RP y MMP-2, que se manifestó en forma diferencial en las zonas craneal y caudal (Estudios IV y V). En el cérvix craneal, las concentraciones de ARNm RE?, RE, RP y MMP-2 mostraron el efecto estimulatorio de E2 inducido por la GnRH y el efecto inhibitorio de la P4 y fueron mayores alrededor de la ovulación inducida que en fase lútea temprana. Sin embargo, en el cérvix caudal los niveles fueron menores y no fueron afectados por los tratamientos, sugiriendo que el anestro estacional condiciona la capacidad de respuesta a los E y el potencial colagenolítico de MMP-2, en forma dependiente de la zona cervical (Estudios IV y V). Al igual que en ciclo estral, la MMP-2 fue predominante en cérvix ovino. La concentración de colágeno fue menor y la actividad de la MMP-2 fue mayor alrededor de la ovulación inducida que en la fase lútea temprana, sugiriendo que el aumento de los E preovulatorios inducen la degradación del colágeno a través del estímulo de la actividad enzimática de la MMP-2 (Estudio V), a diferencia de lo encontrado durante el ciclo estral, donde el estímulo fue sobre la síntesis y la actividad de MMP-2. Se sugiere que el tratamiento con GnRH y P4 previa para inducir la ovulación en anestro, reproduce parcialmente los mecanismos de degradación del colágeno descritos en ovejas ciclando. En todos los estudios realizados durante el ciclo estral en estación reproductiva y el ciclo inducido en anestro estacional se encontraron marcadas diferencias , RP, RLH, ROx, COX-2 y MMP-2?histomorfológicas y/o en la expresión de RE entre cérvix craneal y caudal, lo que refleja distintos roles fisiológicos para estas zonas cervicales. En conclusión, se demuestra que la mayor capacidad de respuesta a los E del cérvix ovino alrededor de la ovulación se asocia con mayor actividad colagenasa y mayor desagregación de las fibras y degradación de colágeno, tanto en ciclo estral natural como inducido en anestro estacional. Se infiere que la desagregación de las fibras y degradación de colágeno estimuladas directa o indirectamente por los E, están involucradas en la remodelación de la MEC y contribuyen a la relajación, dilatación y aumento de la penetrabilidad del cérvix al momento de la ovulación. | |
