| dc.description.abstract | Las células madre mesenquimales (MSCs) presentan gran interés en veterinaria por su potencial uso en medicina regenerativa. Los caninos, equinos y felinos tienen un rol protagónico en veterinaria como animales de compañía y como atletas. Además, las especies domésticas son valiosos modelos animales para los humanos. Existe la necesidad de profundizar sobre los mecanismos de regeneración tisular e inmunodulación de las MSCs para contribuir a la evolución del uso terapéutico, debido a la menor información sobre estas características en animales domésticos en comparación a las de origen humano. El objetivo general planteado en la presente tesis fue profundizar en las diferentes características de las MSCs en tres especies de animales domésticos: canina, equina y felina. Se plantearon diferentes objetivos específicos según la especie doméstica: a) Canina: aislar y caracterizar a las MSCs, comparar las características de las MSCs provenientes de sitios anatómicos diferentes y evaluar el efecto sitio y pasaje celular sobre su multipotencialidad in vitro; b) Equina: aislar y caracterizar a las MSCs y evaluar el uso del lisado plaquetario (PL) alogénico como suplemento de cultivo sobre la capacidad proliferativa, multipotencialidad y su perfil inmunogénico e inmunomodulador; c) Felina: aislar y caracterizar a las MSCs. Para ello, se extrajeron muestras de tejido adiposo (TA) o de médula ósea (MO) para el aislamiento de MSCs (AD-MSCs y BM-MSCs, respectivamente) a un total de 10 caninos, 11 equinos y 6 felinos, y para conformar el pool de PL equino se extrajo sangre de la vena yugular a un total de 6 equinos adultos. Se realizó la propagación ex vivo, prueba de unidades formadoras de colonia fibroblastoides (CFU-F), prueba de tridiferenciación in vitro de las MSCs en condiciones estándar para las tres especies. Para la inmunofenotipificación de MSCs caninas y equinas se determinaron los marcadores a través de citometría de flujo o su expresión génica por RT-qPCR, respectivamente. En el caso de caninos se evalúo la capacidad ostegénica in vitro comparando diferentes fuentes de MSCs como la proveniente de TA subcutánea (Sc) y visceral (Vs) y también a lo largo de consecutivos pasajes celulares. Por otro lado, se reemplazó el suero fetal bovino (FBS) por el PL alogénico con diferente concentración plaquetaria, basal (BPL) y concentrado (CPL), en el cultivo de MSCs equinas provenientes de TA y MO, se evalúo la cinética de crecimiento in vitro a través de la determinación del tiempo de doblaje (DT) y la prueba de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazolio (MTT) en diferentes pasajes celulares. La evaluación del perfil génico de inmunogenecidad e inmunomodulación de las MSCs equinas cultivadas con los nuevos suplementos BPL y CPL se evalúo a través de la RT-qPCR. Los resultados obtenidos fueron los siguientes: a) Caninos: se observó un perfil inmunofenotípico similar para las fuentes Sc y Vs de AD-MSCs. Por otro lado, se observó que los pasajes celulares sucesivos tuvieron un efecto negativo sobre la multipotencialidad in vitro de las ADMSCs de ambas fuentes. Asimimo, se observó que las AD-MSCs Sc presentaron capacidad de tridiferenciación in vitro con mayor longevidad de pasajes celulares y una mayor capacidad de formación de matriz ósea in vitro en comparación a las de origen Vs; b) Equinos: fue posible cultivar AD-MSCs y BM-MSCs con BPL como suplemento de medio. Mostraron una similar cinética de crecimiento en sucesivos pasajes cuando las células eran cultivadas con BPL en comparación al FBS, además de conservar su multipotencialidad in vitro para el caso evaluado con AD-MSCs. Por otro lado, cuando se determinó cinética de proliferación de las BM-MSCs cultivadas con CPL se observó una mayor capacidad proliferativa que BPL. Se describió por primera vez el perfil inmunogénico e inmunomodulador de las BMMSCs cultivadas con CPL y BPL, observado que las células en la condición CPL adquieren un perfil con un leve aumento de los marcadores inmunogénicos e inmunomoduladores; c) Felino: fue posible aislarlas, caracterizarlas y criopreservar AD-MSCs. Evidenciando que presentaron adherencia al plástico, capacidad clonogénica y multipotencialidad in vitro. En conclusión, fue posible el aislamiento, caracterización y criopreservación de MSCs de la especie canina, equina y felina. Para caninos las AD-MSCs de origen Sc presentaron capacidad de tridiferenciación in vitro con mayor longevidad de pasajes celulares y una mayor capacidad de formación de matriz ósea in vitro en comparación a las de origen Vs. Para equinos fue posible cultivar y propagar ex vivo con BPL como suplemento de medio cultivo a AD-MSCs y BM-MSCs. Asimismo, se ha descrito por primera vez el perfil inmunogénico e inmunomodulador de las BM-MSCs equinas y se observó que en la condición CPL adquieren un perfil similar al inducido en un contexto proinflamatorias in vitro a diferencia de aquellas cultivadas con BPL o FBS. Para felinos fue posible aislar, caracterizar y criopreserva a las AD-MSCs. Por último, sería de gran importancia continuar profundizando el conocimiento de las características de las MSCs que aseguren un uso terapéutico seguro y eficaz, en especial su potencial inmunomodulador y de qué manera se pueden optimizar las condiciones in vitro previo al tratamiento. | |
